Apicomplexan invazia celulelor gazdă de către paraziți. Paraziți intracelulari helmintici


Omologii proteinei legați de reticulocite RH și proteinele apicomplexan invazia celulelor gazdă de către paraziți legare a eritrocitelor EBL sunt evacuate din organele specializate și utilizate în etapele timpurii ale invaziei.

Aici arătăm că anticorpii monoclonali împotriva invaziei de merozoiți din blocul PfRH1 RH prin inhibarea specifică a semnalizării calciului în parazit, în timp ce anticorpii monoclonali care inhibă invazia care vizează EBA o proteină EBL nu au efect asupra semnalizării.

Biologia parazitului Abstract Apicomplexa paraziți, inclusiv speciile Toxoplasma și Plasmodiumposedă un mecanism unic de invazie care implică o apoziție strânsă între parazit și membranele plasmatice gazdă, denumită "joncțiune în mișcare" MJ. Am generat o linie de celule knock-out RON4 L1 și am arătat că nu este esențială pentru ciclul litice în vi tro, deși paraziți mutanți ucid șoarecii mai puțin eficient. Introducere Apicomplexa paraziți sunt responsabili pentru bolile umane și animale importante.

Mai departe, vom arăta că inhibarea acestei semnalizări de calciu previne descărcarea EBA și astfel formarea joncțiunii dintre parazit și celula gazdă. Rezultatele noastre indică faptul că PfRH1 are un rol inițial de detectare și de transducție a semnalului care conduce la eliberarea ulterioară a EBA Ele oferă, de asemenea, noi perspective asupra modului în care interacțiunile celulei gazdă RH conduc la evenimente esențiale de semnalizare în aval ale parazitului, sugerând noi ținte pentru intervenția malariei.

Introducere Plasmodium falciparum P. Invazia eritrocitelor este un proces complex în mai multe etape care este mediată de interacțiunile specifice între receptorii gazdă și liganzii paraziți.

Formarea de legături între merozoit și eritrocite este un pas esențial care permite parazitului să se lege ireversibil la gazdă, urmată de activarea sistemului său de mașini cu motor care conduce complet parazitul în eritrocite 1.

Studiile anterioare sugerează implicarea organelor secretoare apice numite rhoptries și micronemes 2. La speciile Plasmodiumun număr de liganzi cheie paraziți care mediază interacțiunile critice cu receptorii gazdă în timpul invaziei sunt localizați în aceste organele apice 1.

RHs și EBL s-au dovedit apicomplexan invazia celulelor gazdă de către paraziți avea un rol crucial în recunoașterea și senzația de celule gazdă, precum și în virulența 4.

apicomplexan invazia celulelor gazdă de către paraziți

În EBL, un domeniu de tip duffy-like-like DBL mediază legarea specifică la diferiți receptori de celule gazdă 5 incluzând glicophorinele A, B și C, precum și antigenul grupului sanguin Duffy 3. În RH, regiunile precise de legare a eritrocitelor sunt încă delimitate 4, apicomplexan invazia celulelor gazdă de către paraziți, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ; completarea receptorului 1 CR1 și basigina au fost identificați a fi receptorii pentru PfRH4 ref.

Deși RHs au fost propuși pentru a avea un rol primordial în detectarea celulelor gazdă 16, 17, EBLs se crede că au un rol direct în formarea joncțiunilor Acest lucru sugerează că sensibilizarea RH și interacțiunea ulterioară cu o eritrocită gazdă adecvată trimite un semnal la merozoitul care declanșează etapele următoare de invazie 4.

Paraziți intracelulari helmintici

Se arată că mAb PfRH1 blochează invazia merozoitului prin inhibarea specifică a semnalizării calciului în parazit, mai degrabă decât prin interferența directă cu legarea eritrocitară a parazitului.

Mai mult, arata ca inhibarea acestei semnalizari a calciului previne evacuarea EBA si astfel previne formarea jonctiunii un pas esential care permite parazitului sa penetreze eritrocita folosind un motor actin-myosin 3.

apicomplexan invazia celulelor gazdă de către paraziți

Rezultatele noastre demonstrează că PfRH1 și EBA au funcții distincte, PfRH1 având un rol inițial de detectare și transducție a semnalului care conduce la eliberarea ulterioară a EBA de la micronă și la formarea joncțiunii. Aceste informații noi ar putea ajuta la identificarea unor noi ținte pentru intervenția împotriva malariei.

Rezultate Mărimile specifice PfRH1 inhibă invazia merozoitului În această lucrare, folosim PfRH1 pentru a studia evenimentele cheie de semnalizare intracelulare care duc la o invazie reușită a eritrocitelor. Aici am generat patru anticorpi monoclonali mAbs: C49, C41, C2 și C50 împotriva acestei regiuni și am validat specificitatea lor folosind teste western blot și imunofluorescență.

human papilloma virus lecenje detoxifiere din mepee

Toți anticorpii recunosc formularul așteptat de și kDa prelucrat de PfRH1 în supernatantul culturii de parazit T, extractele merozoite și schizont, în timp ce în linia de decupare TΔRH1 apicomplexan invazia celulelor gazdă de către paraziți PfRH1 nu s-au detectat benzi echivalente Figura complementară S1a-c. Testele de imunofluorescență au arătat că toate mAb-urile dau tipare punctuale care sunt parțial localizate cu EBA o proteină micronemă cunoscută la capătul apical al merozoitilor în T, în concordanță cu locația așteptată a PfRH1 Figura suplimentară S1d.

Imagine de dimensiune completă Pentru a stabili dacă diferite mAb au fost capabile să inhibe invazia merozoit, s-au efectuat teste de inhibare cu creșterea concentrației de anticorpi utilizând T și TΔRH1 Fig. Am constatat că mAbs C2 și C50 nu au un efect semnificativ asupra invaziei, în timp ce atât mAb, C49 și C41, inhibă invazia într-o manieră dependentă de doză în T Pentru a se asigura că efectul de inhibare a invaziei nu este datorat mărimii mari a mAb care ar putea conduce la un efect apicomplexan invazia celulelor gazdă de către paraziți de blocaream purificat fragmentul Fab al mAb C41 exemplul suplimentar S2c, inserat și am testat inhibarea invaziei 20, Fab fragmentul C41 purificat blochează în mod semnificativ invazia într-o manieră dependentă de doză în paraziți T Figura complementară S2cconfirmând că mAb C41 vizează direct PfRH1.

Inhibitorii mAbs blochează invazia înainte de formarea joncțiunilor Merozoita inhibarea invaziei de către anticorpi este adesea cauzată de anticorpi care interferează direct cu legarea parazitului la receptorul său. Prin urmare, am evaluat capacitatea diferitelor mAb de a inhiba legarea PfRH1 la eritrocite. Ambii mAb ne-inhibitori C2 și C50 și mAb inhibitori C49 și C41la concentrații 0, 3 mg ml- 1 demonstrat a inhiba eficient invazia merozoitului Fig.

Mărimea fiecărui fragment a fost confirmată utilizând mAbs anti-His-tag Fig. Suplimentar S3f. Pe baza rezultatelor Western blot, am sintetizat în continuare șase peptide care se suprapun Apicomplexan invazia celulelor gazdă de către paraziți suplimentară S3g. MAbs inhibitorii C41 și C49, precum și mAb C2 neinhibitor, recunosc aceeași peptidă de 15 meri, în timp ce un alt mAb ne-inhibitor C50 recunoaște o peptidă diferită Figura suplimentară S3h. Este oarecum surprinzător faptul că mAb neinhibitor și inhibitor recunosc aceeași apicomplexan invazia celulelor gazdă de către paraziți cu toate acestea, deoarece un epitop este lung de aminoacizi, este posibil ca mai multe epitopi distinși să se afle în aceeași peptidă.

De fapt, studiile anterioare au arătat că mAbs împotriva epitopilor care sunt foarte apropiați unul de altul prezintă diferite efecte asupra funcțiilor celulare sau biologice 20, 21, Dimensiunile moleculare sunt indicate în stânga în kDa. Întreruperea rutei post-scursă este paraziți de copaci în fiecare instantaneu în secunde sec, alb. Un cerc alb punctat indică o schindă ruptătoare.

Săgețile verzi indică merozoite. Un cerc roșu punctat în jurul unui eritrocitar este adăugat pentru a ajuta la urmărirea infecției. După invazia reușită, apare deformarea eritrocitelor infectate echinocitoză și cu 2 minute eritrocitele se recuperează la forma sa normală.

Introducere Neospora caninum este un protozoar care a fost identificat pentru prima dată ca fiind o cauză a paraliziei canine. Asocierea acestui parazit cu avorturile la bovine l-au transformat intr-o grijă a întregii comunităţi de crescători de vite.

Vedeți și filme suplimentare 1. Merozoitele arestate în joncțiune au fost numărate microscopic.

Inhibitorii mAbs C49 și C41 au blocat semnificativ formarea joncțiunii de merozoiți în T Am constatat că, în absența anticorpilor, merozoții recent eliberați atașează rapid, reorientează și invadează eritrocitele Fig. Imediat după invazie, eritrocitele se contractă și apare echinocitoză, eritrocitele infectate recuperând forma în decurs de 2 minute.

Interesant, în prezența anticorpilor inhibitori ai invaziei C49 fig. În contrast, invazia similară cu cea observată în absența oricărui anticorp este observată în prezența anticorpilor neinhibitori C2 Fig. Suplimentar S4b și Filmul suplimentar 4 sau C50 filmul suplimentar 5.

warts treatment guidelines tratamiento para oxiuros resistentes

Incapacitatea merozoitului de a penetra eritrocitele în ciuda reorientării și a legăturii clare sugerează că anticorpii inhibitori interferează cu o etapă ulterioară a procesului de invazie. Prin urmare, pentru a evalua dacă mAbs inhibă prevenirea formării lipitori ca paraziți, merozoii au fost opriți la joncțiunea strânsă prin tratamentul cu citochalazin D Cyto D Au fost efectuate experimente în absența și prezența mAb PfRH1, iar merozoții arestați prin joncțiune au fost numărați.

cancer de piele cauze si simptome anti parazitare

Luate împreună, aceste date demonstrează în mod clar că inhibitorii mAb inhibă invazia înainte de formarea joncțiunii și sugerează că PfRH1 ar putea avea un rol cheie de semnalizare înainte de formarea joncțiunii. Q1 verde reprezintă merozoiții liberi cu semnale Fluo-4 AM.

Q2 verde reprezintă merozoizi invazivi cu semnale în creștere Fluo-4 AM. Q3 piersic reprezintă merozoiții liberi fără semnal. Q4 roz reprezintă merozoții atașați fără semnal. Melozoitii invadatori vor fi opriți de Cyto D după formarea joncțiunii, în timp ce merozoitele în prezența anticorpilor inhibitori se vor detașa sau vor rămâne atașați la RBC fără a forma o joncțiune.

Pe baza acestor criterii, există două populații distincte: merozoiți liberi și merozoiți legați de RBC.

Paraziți de specii simetrice, Examen coproparazitologic | Synevo

Merozoitele T și TΔRH1 din fiecare preparat invadează cu succes eritrocitele, iar invazia T este inhibată cu succes de către C41, dar nu și C2.

În contrast, nici unul dintre anticorpi nu are niciun impact asupra invaziei în cazul TΔRH1 tabelul suplimentar S3. Luate impreuna, aceste date indica in mod clar ca merozoizii viabili de invazie care contribuie la semnale.

Diamantele albastre reprezintă merozoși incubați cu eritrocite în absența mAbs RBC. Mierozoidele T proaspăt izolate au fost lăsate să invadeze eritrocite urmate de tratamentul cu heparină pg ml- 1 la momente diferite de timp minute cu interval de 2 minute pentru a inhiba invazia.

După punctul final, culturile au fost incubate timp de 40 de ore, iar parazitemiile rezultate au fost analizate prin citometrie în flux.

Aurelia Brezeanu Institutul de Biologie Bucureşti, aurelia. In situ xilogeneza este iniţiată în decursul dezvoltării embrionare şi continuă pe parcursul vieţii plantei prin formarea de la celule procambiale şi cambiale de noi tipuri celulare şi anume celule traheale xilematice care împreună alcătuiesc xilemul.

Barografiile arată inhibarea invaziei diferitelor concentrații 0,mg ml -1 ale mAb-ului specific EBA R în T Exprimarea de suprafață a EBA a fost observată sub microscopie fluorescentă sau măsurată sub cititorul de plăci fluorescente.

Proteina Microneme EBA a merozoiților impermeabili nu va fi colorată decât dacă este translocată pe suprafața merozoitelor. Testele de imunofluorescență au arătat clar că anticorpul inhibitor de invazie C41 blochează expresia de suprafață a EBA în T fig. În contrast, anticorpul inhibitor nu are nici un efect asupra detectării MSP1 pe suprafața merozoitilor Fig.

Навигация по записям

Cuantificarea impactului global al exprimării suprafeței EBA în populația de paraziți a fost evaluată utilizând un cititor de plăci fluorescente. Streptolizina O SLO este adesea utilizată pentru permeabilizarea selectivă a membranei plasmatice a eritrocitelor infectate cu P. Permeabilizarea merozoitilor T cu SLO înainte de colorarea cu anticorp EBA nu a evidențiat nici o diferență în exprimarea globală a EBA internă și bacterii haznale suprafață între merozoții liberi și cei care au răsturnat joncțiunea în culturile tratate cu C41 comparativ cu martorul.

Acest rezultat a fost confirmat prin efectuarea testelor de imunofluorescență și prin măsurarea utilizând cititorul de plăci fluorescente Fig. Suplimentar S6 și Tabelul suplimentar S5. Pentru a determina în continuare dacă SLO poate permeabiliza efectiv membrana merozoită pentru a distinge expresia proteică intern sau pe suprafață, s-au utilizat nucleoporina Nupun marcator de periferie nucleară și markerul histonei H3K9ac Suplimentar S7a, b.

Ghid Identificare Paraziti Word

Nu s-a găsit nici o colorare în merozoții impermeabilizați figura complementară S7c, d. Luate împreună, aceste date confirmă faptul că C41 blochează exprimarea suprafeței EBA pe merozoiți în timpul invaziei.

Au fost capturate atât contrastul diferențial apicomplexan invazia celulelor gazdă de către paraziți interferență DIC cât și imaginile fluorescente. Se prezintă o analiză statistică a efectului C41 asupra exprimării suprafeței EBA a apicomplexan invazia celulelor gazdă de către paraziți.

După ce merozoitul se atașează inițial de eritrocite RBC și se reorientează în sine, PfRH1 eliberat de rhoptry Rh este responsabil pentru detectarea interacțiunii end end I. Imagine de dimensiune completă Oferim suport suplimentar pentru exprimarea suprafeței EBA pe merozoții T arestați prin joncțiune utilizând citometria de flux.

În plus, marcarea expresiei suprafeței EBA cu anticorpi anti-EBA ne-a permis să identificăm populația de merozoiți liberi și arestați care exprimă EBA pe suprafața lor. În plus, aceste rezultate arată că merozoizii liberi exprimă cu greu EBA pe suprafață; în plus, arată, de asemenea, că, în absența anticorpilor inhibitori ai invaziei, mai multe merozoiți atașați de RBC exprimă EBA, în linie cu aceștia având formați o joncțiune.

Apical secretion of micronemal and rhoptry proteins has been observed upon contact of the apicomplexan parasite Toxoplasma gondii 34, 35 as well as P. The precise signalling mechanisms that lead to the release of invasion proteins in a coordinated manner during invasion apicomplexan invazia celulelor gazdă de către paraziți not clear.